背景介绍:

蛋白-蛋白相互作用网络(PPI)是细胞生命活动不可或缺的核心组成部分,它跨越多个时空层面,深刻影响着细胞周期调控、蛋白质合成与分泌、信号转导与代谢等一系列重要细胞学过程。因此,深入研究蛋白互作对于揭示分子调控网络的奥秘具有举足轻重的作用。

目前常用的蛋白互作研究技术包括co-immunoprecipitation, pull-down, protein microarrays等。然而,这些方法在实际应用中面临诸多挑战,如抗体依赖性过强、难以有效捕捉瞬时或弱相互作用等。邻近标记技术应运而生,它通过酶对空间邻近的目标蛋白进行生物素化标记,进而利用亲和纯化和质谱方法表征PPI。其中,基于抗坏血酸过氧化物酶(APEX)的邻近标记和基于生物素连接酶的邻近标记是PPI鉴定中最常用的方法。TurboID是基于邻近依赖性生物素识别(BioID)技术开发的新型技术平台,其核心在于采用突变型大肠杆菌生物素连接酶。beat365正版唯一官网提供的基于质谱的邻近标记技术平台,涵盖了BioID, APEX, TurboID等多种技术,它们在活细胞体系中展现出了卓越的适用性,尤其适用于捕获瞬时发生或动态的蛋白互作关系以及低丰度蛋白或疏水性较强的膜蛋白互作关系。


技术平台:

以TurboID技术平台为例,该技术平台在目的蛋白末端融合了突变型生物素连接酶。在过表达细胞中,加入生物素刺激,在10min之内,即可迅速对目的蛋白的相互作用蛋白进行生物素化标记。这一标记过程不仅速度快,背景低,甚至在室温条件下也能顺利进行。因此,TurboID技术平台极大地拓展了其应用范围,不仅适用于哺乳动物细胞体系,还可应用于植物、昆虫等多种生物体系。随后,通过分离富集生物素标记的蛋白质并进行酶切处理,可以轻松获得肽段样品,进而用于质谱分析,从而深入研究蛋白质的相互作用及其功能。



我们的优势:

① 专业技术优势:团队经验丰富,顶级期刊发表,提供业界权威技术服务。

② 高效无忧方案:采用合适可靠方法推进项目高效进行,提供无忧解决方案。

③ 严谨质量管理:成熟质量管理体系,遵循ISO9001标准,确保报告真实可信。

④ 系统项目管理:从咨询到报告交付,全程及时反馈进度,确保客户的满意度与项目的高效执行。

⑤ 高性能设备:配备Thermo Fisher Orbitrap Exploris 480、Thermo Flsher Q Exactlve HF-X、Bruker timsTOF等先进质谱仪,助力科研突破。


我们的服务:

项目名称

细胞中蛋白质相互作用网络鉴定

样品形式

细胞裂解液、活细胞

硬件平台

Non-contact ultrasonic cell pulverizer,ChemiDoc MP Imaging System,Orbitrap Fusion Lumos Tribrid/Orbitrap Exploris 480/Q Exactive HF-X/timsTOF Pro 2 mass spectrometer

项目周期

4-6周

交付内容

项目报告(包含实验流程,数据分析图表,生信分析结果等)

价格

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案例展示:

项目需求:分析给药处理前后,细胞中与目的蛋白(POI)相互作用蛋白组的变化。

解决方案:利用邻近标记策略,构建POI-TurboID表达载体,在细胞中过表达,分别设置给药组与空白组,生物素化标记。将细胞中蛋白组进行富集后,定性与定量分析生物素化蛋白的差异,以表征POI相互作用蛋白组的变化。


数据展示:



基于TurboID的邻近标记技术实验结果


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